G_βL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425272

Übersicht

Mlst8 kodiert das GβL‑Protein (mLST8), eine zentrale Komponente sowohl des mTORC1‑ als auch des mTORC2‑Komplexes, die die mTOR‑Kinase stabilisiert und die Assemblierung der Komplexe sowie deren Signalausgabe unterstützt. Über diese Komplexe beeinflusst GβL die Wahrnehmung von Nährstoffen und Wachstumsfaktoren, die Kontrolle der Translation, Autophagie und die Regulation des Zytoskeletts und integriert dabei upstream‑Signalwege wie PI3K–AKT und verwandte Pfade. In Mausmodellen wird die Störung von Mlst8 genutzt, um zu untersuchen, wie mTOR‑Signalgebung Zellwachstum, Stoffwechsel und Stressantworten über verschiedene Gewebe und Entwicklungsstadien hinweg koordiniert. Eine fehlregulierte Aktivität des mTOR‑Signalwegs ist in der Biologie proliferativer und metabolischer Erkrankungen weit verbreitet, wodurch Mlst8 ein nützlicher Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Signalwegabhängigkeit und zur Umverdrahtung von Signalisierungsnetzwerken ist.

Das GβL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Mlst8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Mlst8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Mlst8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GβL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Mlst8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GβL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Mlst8-Exone abzielen, die für die GβL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Mlst8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GβL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GβL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Mlst8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GβL HDR-Plasmid (m) und GβL HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Mlst8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Mlst8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.