Plásmido CRISPR de Activación (h) G_{β 2}: sc-402936-ACT

GNB2 codifica la subunidad beta 2 (Gβ2) de la proteína G humana, un componente central de las proteínas G heterotriméricas que acoplan los receptores acoplados a proteína G (GPCR) activados con efectores intracelulares. Al asociarse con subunidades Gγ, Gβ2 ayuda a regular salidas de señalización como la actividad de la adenilil ciclasa, la activación de la fosfolipasa Cβ, la modulación de canales iónicos y las vías posteriores asociadas a MAPK y PI3K, que determinan la proliferación celular, la migración y la neurotransmisión. La señalización alterada de GPCR/proteína G en la que participa GNB2 se ha asociado con una transducción de señales desregulada en contextos neurológicos y oncogénicos, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de redes de señalización próximas al receptor. Como andamiaje de señalización de expresión amplia, Gβ2 se utiliza a menudo para investigar la intercomunicación entre vías y programas transcripcionales dependientes del estímulo.

Gβ 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GNB2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gβ 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GNB2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GNB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gβ 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GNB2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gβ 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gβ 2 en células tumorales con expresión de GNB2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.