Particules Lentivirales d'Activation (m2) G_{β 1}: sc-420606-LAC-2

Chez la souris, Gnb1 code la sous-unité Gβ1 des protéines G hétérotrimériques, un composant central de la signalisation des récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) qui forme des dimères obligatoires avec des sous-unités Gγ afin de réguler l’activité de Gα et de transmettre des signaux vers des effecteurs tels que les adénylyl cyclases, la phospholipase Cβ et les canaux ioniques. Par ces interactions, Gβ1 contribue à coordonner la dynamique des seconds messagers, l’excitabilité membranaire et des cascades de kinases, notamment la voie MAPK/ERK, modulant ainsi les réponses cellulaires aux neurotransmetteurs, aux hormones et aux stimuli sensoriels. Une altération de la signalisation dépendante de Gβ1 est pertinente pour l’étude des dysfonctionnements neurodéveloppementaux et neurophysiologiques, où des perturbations de l’équilibre des voies GPCR peuvent affecter la transmission synaptique et l’activité des réseaux neuronaux. L’édition génétique de Gnb1 ou sa perturbation dans des modèles murins permet une dissection mécanistique du couplage GPCR-effecteur, des biais de signalisation et des interactions entre voies, à l’aide d’essais tels que des mesures de cAMP/PLC, l’électrophysiologie et le profilage phosphoprotéomique.

Les particules d'activation lentivirales Gβ 1 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Gnb1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Gβ 1 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Gnb1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Gβ 1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Gnb1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.