Particules Lentivirales d'Activation (h2) G_{β 1}: sc-401901-LAC-2

Le gène humain GNB1 code la sous-unité bêta 1 des protéines G (Gβ1), un composant central des protéines G hétérotrimériques qui forme des dimères obligatoires avec les sous-unités Gγ afin de relier les GPCR activés à leurs effecteurs en aval. Les complexes contenant Gβ1 coordonnent la propagation du signal au sein des voies cAMP/PKA, PLCβ–IP3/DAG–PKC et de régulation des canaux ioniques, modulant la dynamique des seconds messagers, l’excitabilité membranaire et la désensibilisation/internalisation des récepteurs. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de GNB1 sont associées à des altérations de la neurotransmission et de la signalisation du développement, et ont été rapportées dans des troubles du neurodéveloppement ainsi que dans certains cancers, ce qui étaye son intérêt pour l’étude des dérégulations des réseaux de GPCR. L’édition du gène GNB1 permet une dissection mécanistique de la signalisation dépendante de Gβγ, l’analyse des interactions épistatiques avec des nœuds GPCR/effecteurs, et la cartographie des phénotypes dans des modèles cellulaires neuronaux, cardiaques et prolifératifs.

Les particules d'activation lentivirales Gβ 1 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GNB1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Gβ 1 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GNB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Gβ 1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GNB1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.