G_{α z} Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402241-ACT

GNAZ codifica a subunidade alfa Gαz de uma proteína G heterotrimérica inibitória, um mediador de sinalização da família Gi/o que acopla determinados receptores acoplados à proteína G (GPCRs) à supressão da adenilil ciclase e à redução do cAMP intracelular. Ao regular a dinâmica de segundos mensageiros, a Gαz influencia a sinalização a jusante mediada por PKA, a modulação de canais iônicos e programas de fosforilação que moldam a excitabilidade neuronal, a secreção e a dessensibilização de receptores. A atividade de GNAZ cruza-se com vias responsivas a neurotransmissores e hormônios, e alterações no acoplamento GPCR–proteína G têm sido implicadas em fenótipos neuropsiquiátricos, na função plaquetária e em anormalidades de sinalização endócrina. Como uma subunidade Gα inibitória distinta e insensível à PTX, a Gαz oferece um ponto útil para dissecar a sinalização inibitória específica de receptores em comparação com outras proteínas Gi.

Gα z O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNAZ sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gα z O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNAZ em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNAZ, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gα z. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNAZ nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gα z no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gα z em células tumorais com expressão de GNAZ silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.