Plasmide Double Nickase (h) Gα t2 : sc-401528-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Gα t2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Gα t2 Double Nickase (h) et le plasmide Gα t2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GNAT2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Gα t2 | sc-401528-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Gα t2 | sc-401528-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAT2 code pour la sous-unité humaine Gαt2 (Gαt2), une sous-unité α de protéine G hétérotrimérique surtout connue pour coupler les opsines activées aux enzymes effectrices en aval lors de la phototransduction. Après activation d’un GPCR, Gαt2 favorise la signalisation via le métabolisme des nucléotides cycliques et la régulation associée des canaux ioniques, permettant des changements rapides de l’excitabilité cellulaire dépendants du stimulus. Dans l’architecture plus large de la signalisation par GPCR, GNAT2 contribue à intégrer l’activation des récepteurs aux voies de seconds messagers et au cycle des protéines G, médié par la liaison et l’hydrolyse du GTP. L’altération des composants de la signalisation liée à la transducine a été impliquée dans des dysfonctionnements du système visuel et fournit un cadre pour étudier les mécanismes d’amplification du signal et d’adaptation pilotés par les GPCR.
Gα t2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNAT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNAT2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNAT2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNAT2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.