Plasmide CRISPR/Cas9 KO G_{α t2} (h): sc-401528

Présentation

GNAT2 code pour la sous-unité alpha de la transducine (Gαt2), une protéine G hétérotrimérique qui couple les opsines activées à des effecteurs en aval lors de la phototransduction. À la suite de la stimulation d’un GPCR, Gαt2 échange le GDP contre du GTP, se dissocie du dimère Gβγ et module la signalisation des nucléotides cycliques afin de façonner l’excitabilité cellulaire et les réponses dépendantes du stimulus. Bien que surtout caractérisé dans des contextes de signalisation rétinienne, GNAT2 constitue un point d’entrée pratique pour étudier le couplage GPCR–protéine G, la régulation du cycle GTPasique et les mécanismes de terminaison du signal en interface avec le métabolisme du cGMP et le contrôle des canaux ioniques. Des perturbations génétiques de GNAT2 ont été associées à des phénotypes héréditaires de dysfonction visuelle, ce qui étaye sa pertinence pour modéliser des défauts de signalisation sensorielle et la compensation des voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Gα t2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GNAT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GNAT2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GNAT2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Gα t2 .

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GNAT2 pour l'étude de la signalisation de Gα t2 , les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GNAT2 essentiels à la fonction de Gα t2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GNAT2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Gα t2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Gα t2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GNAT2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Gα t2 plasmide HDR (h) et le Gα t2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GNAT2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GNAT2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.