Plasmide Double Nickase (h) G_{α o}: sc-400897-NIC

GNAO1 code la sous-unité α de la protéine G hétérotrimérique humaine Gαo, une protéine G inhibitrice prédominante dans le système nerveux, qui couple de nombreux RCPG (GPCR) à des effecteurs en aval. Lors de l’activation du récepteur, Gαo régule l’adénylyl cyclase et coordonne la signalisation via les sous-unités βγ afin de moduler les canaux ioniques, le trafic vésiculaire et la libération de neurotransmetteurs, façonnant ainsi la transmission synaptique et l’excitabilité neuronale. Ce nœud de signalisation s’intègre aux voies dépendantes de l’AMPc et à des réseaux plus larges régulés par les RCPG, qui contrôlent la différenciation et l’activité des circuits. Une dérégulation de la signalisation dépendante de GNAO1 a été associée à des phénotypes de troubles neurodéveloppementaux et de troubles du mouvement, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur des modèles neuronaux et des essais de transduction du signal.

Gα o Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNAO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNAO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNAO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNAO1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.