Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO Gα o (h): sc-400897
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Gα o Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Gα o, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Gα o Antibody (A2): sc-13532
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Gα o (h) | sc-400897 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
GNAO1 code la sous-unité alpha Gαo des protéines G hétérotrimériques humaines, un composant de signalisation dominant de la famille Gi/o, enrichi dans les neurones, qui couple les GPCR activés à l’inhibition de l’adénylate cyclase et à la modulation des canaux ioniques. En régulant la signalisation cAMP/PKA, l’activité des canaux Ca2+ et K+, ainsi que les voies MAPK en aval et la libération de neurotransmetteurs, Gαo façonne la transmission synaptique, l’excitabilité neuronale et le développement des réseaux. Une altération de la fonction de GNAO1 est associée à des phénotypes de troubles neurodéveloppementaux et du mouvement, ce qui en fait un nœud clé pour étudier l’architecture de la signalisation pilotée par les GPCR dans des modèles cellulaires et neuronaux. La perturbation expérimentale de GNAO1 soutient des études mécanistiques sur la spécificité du couplage des récepteurs, la dynamique des seconds messagers et les réponses transcriptionnelles dépendantes de l’activité.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Gα o (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GNAO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GNAO1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GNAO1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Gα o.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GNAO1 pour l'étude de la signalisation de Gα o, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de GNAO1 essentiels à la fonction de Gα o
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GNAO1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Gα o plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Gα o plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GNAO1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Gα o plasmide HDR (h) et le Gα o (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GNAO1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GNAO1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.