G_{α 13} CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401180-ACT

GNA13 kodiert die humane heterotrimere G‑Protein‑α‑Untereinheit Gα13, einen zentralen Signalüberträger von mehreren GPCRs zu Signalwegen der Rho‑Familie von GTPasen. Nach Aktivierung bindet Gα13 an RhoGEFs wie ARHGEF12 (LARG) und fördert dadurch RhoA‑getriebenes Zytoskelett‑Remodeling, Zellkontraktilität sowie die Regulation von Zelladhäsion und -migration. Diese Signalachse trägt zur Funktion von Gefäß- und Immunzellen bei und ist mit Mechanotransduktion sowie Genexpressionsprogrammen verknüpft, die die zelluläre Plastizität prägen. Eine fehlregulierte GNA13‑Signalgebung wurde in Krebsmodellen mit veränderten Invasions- und Überlebensphänotypen assoziiert; zudem wurden wiederkehrende Veränderungen in GNA13 bei bestimmten hämatologischen Malignomen beschrieben, was seine Relevanz für eine signalwegorientierte Forschung unterstreicht.

Gα 13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GNA13-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Gα 13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GNA13-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GNA13-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Gα 13-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GNA13-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Gα 13-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Gα 13-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GNA13-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.