GSTT1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408735-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GSTT1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GSTT1ダブルニカースプラスミド（h）およびGSTT1ダブルニカースプラスミド（h2）は、GSTT1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GSTT1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-408735-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSTT1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-408735-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
グルタチオンS-トランスフェラーゼ・シータ1（GSTT1）は第II相解毒酵素であり、求電子性の外因性化学物質（ゼノバイオティクス）や反応性の内因性代謝物に対するグルタチオン抱合反応を触媒して、レドックス恒常性の維持および酸化ストレスからの防御に寄与します。DNAやタンパク質を損傷し得る中間体の蓄積を抑える細胞防御経路に関与し、環境毒性物質や薬物由来の反応性種に対する感受性にも影響します。GSTT1にみられる一般的な遺伝的多型や欠失（ヌル）型遺伝子型は、個人間の代謝差と関連し、がん感受性、炎症性疾患、化学物質曝露に対する有害反応との関連で研究されています。幅広い基質特異性をもつ細胞質酵素として、GSTT1はヒト細胞モデルにおいて、グルタチオン依存的な生体内変換（バイオトランスフォーメーション）やストレス応答シグナル伝達を解析するためにしばしば用いられます。
GSTT1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GSTT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GSTT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GSTT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GSTT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。