GSTT1 Double Nickase Plasmid (h): sc-408735-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GSTT1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GSTT1 Double-Nickase-Plasmid (h) und GSTT1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GSTT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GSTT1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408735-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSTT1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408735-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Glutathion-S-Transferase Theta 1 (GSTT1) ist ein Entgiftungsenzym der Phase II, das die Konjugation von Glutathion an elektrophile Xenobiotika und reaktive endogene Metaboliten katalysiert und dadurch die Redoxhomöostase sowie den Schutz vor oxidativem Stress unterstützt. Es trägt zu zellulären Abwehrwegen bei, die die Anreicherung von Zwischenprodukten begrenzen, welche DNA und Proteine schädigen können, und beeinflusst damit die Empfindlichkeit gegenüber Umwelttoxikanten und aus Arzneistoffen stammenden reaktiven Spezies. Häufige genetische Variationen und Null-Genotypen in GSTT1 sind mit interindividuellen Unterschieden im Stoffwechsel assoziiert und wurden im Zusammenhang mit Krebsanfälligkeit, entzündlichen Erkrankungen und unerwünschten Reaktionen auf chemische Expositionen untersucht. Als zytosolisches Enzym mit breiter Substratspezifität wird GSTT1 häufig genutzt, um die glutathionabhängige Biotransformation und Stressantwort-Signalwege in humanen Zellmodellen zu untersuchen.
GSTT1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GSTT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GSTT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GSTT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GSTT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.