Plasmide Double Nickase (h) GSTP1: sc-402084-NIC

GSTP1 code la glutathion S-transférase pi 1, une enzyme cytosolique de détoxification de phase II qui catalyse la conjugaison du glutathion à des composés électrophiles, contribuant au maintien de l’homéostasie redox et à la défense cellulaire contre le stress oxydatif. GSTP1 participe au métabolisme des xénobiotiques et module la signalisation activée par le stress, notamment la régulation des voies MAPK telles que JNK via des interactions protéine–protéine. Une expression altérée de GSTP1 ou la méthylation de son promoteur ont été associées à des modifications de la capacité antioxydante et des réponses cellulaires au stress dans de multiples contextes pertinents en cancérologie, où ce gène est souvent étudié comme marqueur de l’état de détoxification. Ces fonctions font de GSTP1 un nœud utile pour étudier le stress métabolique, les mécanismes de réponse aux médicaments et les réseaux de signalisation régulés par le statut redox dans les cellules humaines.

GSTP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GSTP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GSTP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GSTP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GSTP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.