Plasmide Double Nickase (h) GSTM4: sc-405305-NIC

GSTM4 code une glutathion S-transférase de classe Mu qui catalyse la conjugaison du glutathion réduit à des composés électrophiles, soutenant la détoxification de phase II et l’homéostasie redox. En métabolisant des produits de peroxydation lipidique et des intermédiaires xénobiotiques, GSTM4 contribue à la défense cellulaire contre le stress oxydant et chimique et aide à réguler les espèces réactives de l’oxygène intracellulaires. Son activité s’inscrit à l’interface du métabolisme du glutathion et de programmes plus larges de réponse antioxydante, qui influencent la signalisation, la fonction mitochondriale et la survie cellulaire. Des altérations de l’expression ou de la fonction de GSTM4 ont été associées dans la littérature à une variabilité de la prise en charge des xénobiotiques et de la tolérance au stress, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la réponse aux toxiques et du remodelage métabolique associé au cancer.

GSTM4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GSTM4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GSTM4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GSTM4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GSTM4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.