GSTM4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405305-NIC

GSTM4は、ムー（Mu）クラスのグルタチオンS-トランスフェラーゼをコードしており、還元型グルタチオンを求電子性化合物に抱合させる反応を触媒することで、第II相解毒および酸化還元恒常性を支えます。脂質過酸化生成物や外来性化合物（ゼノバイオティクス）の代謝中間体を代謝することにより、GSTM4は酸化ストレスや化学ストレスに対する細胞防御に寄与し、細胞内の活性酸素種（ROS）の制御にも関与します。その活性はグルタチオン代謝や、シグナル伝達・ミトコンドリア機能・細胞生存に影響するより広範な抗酸化応答プログラムと連動しています。GSTM4の発現や機能の変化は、文献上、ゼノバイオティクスの処理能やストレス耐性の個体差と関連づけられており、毒性物質応答の機序研究や、がんに関連した代謝リモデリングの研究において重要な対象となります。

GSTM4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GSTM4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GSTM4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GSTM4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GSTM4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。