Plasmide CRISPR d'Activation (h) GSTM3: sc-404418-ACT

La glutathion S‑transférase mu 3 (GSTM3) est une enzyme cytosolique de détoxification de phase II qui catalyse la conjugaison du glutathion à des xénobiotiques électrophiles ainsi qu’à des produits réactifs de la peroxydation lipidique, contribuant au maintien de l’homéostasie rédox cellulaire. En limitant l’accumulation d’intermédiaires réactifs, GSTM3 influence les réponses au stress oxydant, l’intégrité mitochondriale et les processus de signalisation en aval liés à l’inflammation et à la survie cellulaire. Des variations de l’expression ou de l’activité de GSTM3 ont été associées à des différences interindividuelles du métabolisme des xénobiotiques et à la susceptibilité aux dommages oxydatifs dans des tissus fortement exposés à l’environnement. En tant que composante du réseau plus large du métabolisme du glutathion, GSTM3 est fréquemment étudiée dans le cadre de la prise en charge des substances toxiques, du métabolisme des médicaments et de programmes transcriptionnels d’adaptation au stress.

GSTM3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GSTM3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GSTM3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GSTM3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GSTM3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GSTM3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GSTM3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GSTM3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GSTM3 dans les cellules tumorales présentant une expression de GSTM3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.