Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GSK-3α Double Nickase Plasmid (h): sc-400518-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GSK-3α Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GSK-3α Double-Nickase-Plasmid (h) und GSK-3α Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GSK3A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GSK-3α: sc-5264
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GSK-3α Double Nickase Plasmid (h) | sc-400518-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSK-3α Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400518-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GSK3A kodiert die Glykogensynthase-Kinase 3 Alpha (GSK-3α), eine konstitutiv aktive Serin/Threonin-Kinase, die Signale aus den Wnt/β-Catenin-, PI3K–AKT- und Insulin-Signalwegen integriert, um den Glykogenstoffwechsel, die Zellzyklusprogression und die Apoptose zu regulieren. Durch die Phosphorylierung von Substraten wie β-Catenin und mehreren Transkriptionsregulatoren beeinflusst GSK-3α Genexpressionsprogramme, die Differenzierung und zelluläre Stressantworten steuern. Eine fehlregulierte GSK-3α-Aktivität und die nachgeschaltete Signalübertragung wurden in unterschiedlichen krankheitsrelevanten Kontexten mit veränderter Proliferation, metabolischer Homöostase und inflammatorischer Signalgebung in Verbindung gebracht. Als Paralog von GSK3B wird GSK3A häufig untersucht, um isoformspezifische Funktionen in Signalnetzwerken und kompensatorische Mechanismen aufzuklären.
GSK-3α Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GSK3A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GSK3A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GSK3A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GSK3A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.