Plasmide CRISPR d'Activation (h) GSH-2: sc-407550-ACT

Le gène humain **GSX2 (GSH-2)** code un facteur de transcription à homéoboîte qui régule la régionalisation et la spécification des lignages neuronaux au cours du développement du prosencéphale, avec des rôles majeurs dans l’identité des progéniteurs ventraux du télencéphale et les programmes de différenciation des interneurones. En se liant à des éléments cis‑régulateurs et en coordonnant des réseaux transcriptionnels avec d’autres régulateurs du développement, GSH-2 contribue à contrôler les transitions entre prolifération et différenciation ainsi que des modules d’expression génique en aval qui façonnent la formation des circuits neuronaux. Une activité de GSX2 dérégulée ou une expression développementale altérée a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux via la perturbation des réseaux de régulation génique qui gouvernent les décisions de destinée neuronale. En tant que marqueur et moteur fonctionnel des états de progéniteurs neuraux, GSX2 est largement étudié dans des modèles de différenciation de cellules souches et de cartographie des circuits transcriptionnels.

GSH-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GSX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GSH-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GSX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GSX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GSH-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GSX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GSH-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GSH-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GSX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.