Plasmide CRISPR d'Activation (h) GSH-1: sc-404282-ACT

GSX1 (également appelé GSH-1 dans certaines annotations) code un facteur de transcription à homéoboîte impliqué dans la mise en place précoce des patrons de développement et la spécification des lignages neuronaux, via une liaison à l’ADN spécifique de séquence et la régulation transcriptionnelle. Dans les cellules humaines, les programmes régulateurs associés à GSX1 s’articulent avec des réseaux géniques du neurodéveloppement qui coordonnent la prolifération des progéniteurs, l’identité régionale et la différenciation. La dérégulation des circuits transcriptionnels pilotés par des gènes homéobox est fréquemment étudiée dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux congénitaux et de décisions de destinée cellulaire altérées, ce qui fait de GSX1 un nœud utile pour explorer le contrôle transcriptionnel de l’engagement de lignée. En tant que régulateur nucléaire, GSX1/GSH-1 est couramment évalué par des profils d’expression et des tests basés sur la chromatine afin de cartographier les cibles en aval et les interactions entre voies de signalisation.

GSH-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GSX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GSH-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GSX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GSX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GSH-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GSX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GSH-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GSH-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GSX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.