Plasmide CRISPR/Cas9 KO GRP (m): sc-432553

Présentation

Le gène murin **Grp** code le peptide libérateur de gastrine (GRP), un neuropeptide qui transmet principalement ses signaux via le récepteur GRPR couplé aux protéines G, afin de réguler les flux intracellulaires de Ca²⁺ ainsi que les voies de signalisation MAPK/ERK et PLC en aval. Le GRP contribue à la communication neuronale, à la sécrétion neuroendocrine et à l’activité du muscle lisse, et peut influencer des circuits circadiens et sensibles au stress selon le contexte tissulaire. Dans les systèmes immunitaire et gastro-intestinal, la signalisation médiée par le GRP a été associée à la modulation de programmes inflammatoires et de la physiologie épithéliale. Une activité dérégulée de l’axe GRP/GRPR est fréquemment étudiée dans des modèles de prolifération cellulaire anormale, de neuroinflammation et de réseaux de signalisation associés aux tumeurs, ce qui soutient sa pertinence pour la recherche mécanistique sur les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GRP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Grp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Grp, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Grp à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GRP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Grp pour l'étude de la signalisation de GRP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Grp essentiels à la fonction de GRP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Grp pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GRP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GRP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Grp. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GRP plasmide HDR (m) et le GRP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Grp pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Grp définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.