Plásmido CRISPR de Activación (h) GROβ: sc-416416-ACT

CXCL2 codifica el oncogén beta regulado por el crecimiento (GROβ), una quimiocina CXC que señaliza principalmente a través de CXCR2 para promover la quimiotaxis, la adhesión y la activación de neutrófilos durante las respuestas inflamatorias agudas. La expresión de GROβ es inducida por la actividad de las vías NF-κB y MAPK aguas abajo de receptores de reconocimiento de patrones y de citocinas proinflamatorias, conectando la detección inmunitaria innata con el reclutamiento de leucocitos. En los microambientes tisulares, CXCL2 contribuye a la amplificación de redes de citocinas y quimiocinas que modelan el tráfico de células mieloides, las señales angiogénicas y el diálogo entre estroma e inmunidad. La señalización desregulada de CXCL2/GROβ se estudia con frecuencia en trastornos inflamatorios y en la inflamación asociada a tumores, donde la infiltración de neutrófilos y células mieloides puede influir en fenotipos asociados a la enfermedad.

GROβ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CXCL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GROβ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CXCL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CXCL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GROβ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CXCL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GROβ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GROβ en células tumorales con expresión de CXCL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.