Plasmide CRISPR d'Activation (h) GROα: sc-403256-ACT

CXCL1 code la chimiokine GROα, un ligand CXC ELR+ sécrété qui se lie à CXCR2 afin de favoriser la chimiotaxie des neutrophiles, l’activation endothéliale et les réseaux de cytokines inflammatoires. GROα participe à des cascades de signalisation de l’immunité innée, notamment les voies NF-κB et MAPK, en modulant le recrutement des leucocytes et le remodelage tissulaire lors d’inflammations aiguës et chroniques. Une expression dérégulée de CXCL1/GROα a été associée à des microenvironnements inflammatoires et à des interactions stroma–immunité altérées observées dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud moléculaire utile pour disséquer la migration cellulaire induite par les chimiokines et la signalisation paracrine. Les modèles in vitro et in vivo exploitent souvent CXCL1 pour étudier la détection de gradients, le trafic myéloïde et les modifications des compartiments épithélial et vasculaire associées à l’inflammation.

GROα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CXCL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GROα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CXCL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CXCL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GROα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CXCL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GROα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GROα dans les cellules tumorales présentant une expression de CXCL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.