Plásmido CRISPR de Activación (h) GRK 5: sc-401285-ACT

La GRK5 humana (quinasa 5 de receptores acoplados a proteína G) es una quinasa de serina/treonina que fosforila GPCR activados para regular la desensibilización del receptor, su internalización y la amplitud de la señalización aguas abajo. Más allá del control canónico de los GPCR, la GRK5 puede influir en vías dependientes de β-arrestina y modular nodos de señalización vinculados a procesos regulados por Ca2+, respuestas inflamatorias y la adaptación celular al estrés. La actividad de GRK5 configura el “crosstalk” entre vías que afecta a redes de señalización cardiovasculares y neurobiológicas, y la expresión o regulación alteradas de GRK5 se han asociado con fenotipos relevantes para enfermedades, incluido el remodelado cardíaco y la disfunción neurológica. Estas funciones hacen de GRK5 una diana útil para diseccionar el sesgo de señalización del receptor, la cinética de terminación de la señal y programas transcripcionales dependientes del contexto.

GRK 5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GRK5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GRK 5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GRK5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GRK5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GRK 5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GRK5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GRK 5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GRK 5 en células tumorales con expresión de GRK5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.