Plasmide Double Nickase (h) GRK 2: sc-400558-NIC

GRK2 (G protein-coupled receptor kinase 2), codée par le gène humain GRK2, est une kinase sérine/thréonine qui phosphoryle les RCPG activés afin d'initier le recrutement de la β-arrestine, la désensibilisation du récepteur, son internalisation et une reprogrammation de la signalisation. En régulant l'amplitude et la durée de la signalisation des RCPG, GRK2 influence les voies en aval cAMP/PKA, MAPK/ERK et PI3K-AKT, modulant des réponses cellulaires telles que la chimiotaxie, la prolifération et la signalisation du stress. GRK2 interagit aussi avec des substrats non RCPG et des nœuds de signalisation, reliant le trafic des récepteurs à un contrôle plus large de la dynamique du cytosquelette et de la transduction du signal. Une expression ou une activité dérégulée de GRK2 a été associée à une altération de la signalisation des récepteurs β-adrénergiques et des récepteurs aux chimiokines, et elle est étudiée dans des contextes incluant le remodelage cardiovasculaire, les dysfonctionnements métaboliques, l'inflammation et des réseaux de signalisation liés au cancer.

GRK 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRK2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.