Plasmide CRISPR d'Activation (m) GRHL2: sc-434250-ACT

Grhl2 code le facteur de transcription murin GRHL2, un régulateur de type Grainyhead de la différenciation épithéliale, de la polarité apico-basale et de la formation de barrières. GRHL2 coordonne des programmes géniques impliqués dans l’assemblage des jonctions d’adhérence, l’intégrité des jonctions serrées et le développement des épithéliums stratifiés, reliant l’adhésion cellule–cellule à la prolifération et à la morphogenèse tissulaire. Dans divers systèmes modèles, une activité altérée de GRHL2 a été associée à une dérégulation des transitions d’état épithélial, notamment des processus liés à la plasticité épithélio-mésenchymateuse, à la réparation des plaies et à l’organogenèse. Ces fonctions font de Grhl2 un nœud pertinent pour étudier la spécification des lignages épithéliaux et les voies qui influencent l’homéostasie épithéliale ainsi que le remodelage associé aux maladies.

GRHL2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Grhl2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GRHL2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Grhl2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Grhl2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GRHL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Grhl2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GRHL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GRHL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Grhl2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.