Plásmido CRISPR de Activación (h) gremlin-1: sc-401244-ACT

GREM1 codifica gremlin-1, una glucoproteína secretada que actúa como antagonista extracelular de las proteínas morfogenéticas óseas (BMP2, BMP4 y BMP7), modulando la señalización de la superfamilia BMP/TGF-β durante el desarrollo y en la homeostasis de los tejidos adultos. Al regular la disponibilidad de los ligandos, gremlin-1 influye en decisiones de destino celular, en las interacciones epitelio–mesénquima y en programas de remodelación como la proliferación, la diferenciación y la fibrosis. La expresión desregulada de GREM1 se ha vinculado con alteraciones en la comunicación estroma–epitelio, depósito anómalo de matriz y señalización microambiental protumorigénica en múltiples contextos patológicos, incluidos trastornos fibróticos y vías asociadas al cáncer. Estas características hacen de GREM1 un objetivo útil para estudios mecanísticos sobre el control de la vía BMP y las redes de señalización extracelular.

gremlin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GREM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

gremlin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GREM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GREM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de gremlin-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GREM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de gremlin-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía gremlin-1 en células tumorales con expresión de GREM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.