Plasmide Double Nickase (h) GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor: sc-400071-NIC

NR3C1 code le récepteur des glucocorticoïdes (GR), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui convertit les signaux du cortisol et des glucocorticoïdes de synthèse en programmes transcriptionnels dépendants du contexte. Après liaison de l’hormone, le GR subit une activation dépendante de chaperonnes, une translocation nucléaire et une liaison à l’ADN au niveau des éléments de réponse aux glucocorticoïdes, tout en modulant également d’autres facteurs de transcription tels que NF-κB et AP-1. Par ces mécanismes, le GR régule la signalisation inflammatoire et immunitaire, le métabolisme cellulaire, les réponses au stress liées au rythme circadien et l’apoptose, en intégrant des signaux issus des voies endocriniennes et des cytokines. Une signalisation ou une expression dérégulée de NR3C1 est impliquée dans la résistance aux glucocorticoïdes et une régulation anormale de l’axe du stress, avec des implications pour les maladies inflammatoires et les cancers hormonosensibles, où le GR peut influencer la prolifération et la réponse aux traitements.

GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NR3C1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NR3C1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NR3C1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NR3C1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.