Plasmide CRISPR d'Activation (h) GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor: sc-400071-ACT

NR3C1 code le récepteur des glucocorticoïdes (GR), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui, après liaison de l’hormone, se transloque dans le noyau et régule la transcription via des éléments de réponse aux glucocorticoïdes, ainsi que par des interactions de « tethering » avec des facteurs tels que NF-κB et AP-1. La signalisation du GR intègre les signaux endocriniens au remodelage de la chromatine afin de contrôler les programmes géniques inflammatoires, l’homéostasie métabolique, la différenciation cellulaire et les réponses au stress. Par des interactions croisées avec les voies de signalisation MAPK, PI3K–AKT et celles des cytokines, NR3C1 contribue à ajuster des réseaux transcriptionnels spécifiques au type cellulaire et la régulation par rétrocontrôle de l’axe hypothalamo–hypophyso–surrénalien. Une expression ou une fonction dérégulée de NR3C1 a été associée à une modification de la sensibilité aux glucocorticoïdes et fait l’objet de nombreuses études dans des contextes de dérégulation immunitaire, de biologie du stress neuropsychiatrique et d’adaptation des cellules cancéreuses aux facteurs de stress du microenvironnement.

GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NR3C1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NR3C1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NR3C1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NR3C1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de NR3C1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.