Plásmido CRISPR de Activación (h) GPRC6A: sc-403492-ACT

GPRC6A codifica un receptor acoplado a proteína G de clase C implicado en la detección de nutrientes y en la comunicación cruzada endocrino-metabólica, respondiendo a señales extracelulares como aminoácidos básicos y cationes divalentes. A través de su acoplamiento a proteínas G heterotriméricas, GPRC6A puede modular la señalización de segundos mensajeros y las vías de quinasas aguas abajo que influyen en el metabolismo celular, la secreción hormonal y el tono inflamatorio. Su actividad se ha estudiado en contextos que incluyen la homeostasis de la glucosa, el equilibrio energético y la señalización osteoendocrina, vinculando la señalización dependiente del receptor con la biología metabólica y esquelética. En la literatura, la expresión o señalización alteradas de GPRC6A se han asociado con fenotipos complejos de enfermedad relevantes para la obesidad, la diabetes tipo 2 y rasgos cardiometabólicos, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de vías.

GPRC6A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPRC6A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPRC6A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPRC6A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPRC6A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPRC6A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPRC6A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPRC6A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPRC6A en células tumorales con expresión de GPRC6A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.