Plasmide Double Nickase (m) GPRC5B: sc-425694-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) GPRC5B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPRC5B Double Nickase (m) et le plasmide GPRC5B Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Gprc5b. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) GPRC5B | sc-425694-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) GPRC5B | sc-425694-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Gprc5b** code **GPRC5B**, une protéine membranaire de type récepteur orphelin couplé aux protéines G, impliquée dans la modulation de cascades de signalisation intracellulaires en aval de signaux de facteurs de croissance et de cytokines. GPRC5B a été associée à la régulation de l’activité des voies **MAPK/ERK** et **PI3K–AKT**, influençant la prolifération et la différenciation cellulaires ainsi que l’homéostasie métabolique de manière dépendante du tissu. Dans le système nerveux et les tissus périphériques, des altérations de l’expression de GPRC5B ont été liées à la signalisation inflammatoire, à la sensibilité à l’insuline et à la gestion des lipides, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de phénotypes associés à l’obésité et de dysfonctionnements cardiométaboliques. Sa localisation membranaire et son contexte de signalisation étayent également des travaux portant sur la dynamique des réseaux proximaux au récepteur et sur les programmes transcriptionnels induits par des stimuli extracellulaires.
GPRC5B Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Gprc5b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Gprc5b. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Gprc5b. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Gprc5b.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.