Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPRC5B (h): sc-409271

Présentation

GPRC5B (récepteur couplé aux protéines G, classe C, groupe 5, membre B) est une protéine membranaire de type RCPG orphelin impliquée dans l’intégration des signaux à la surface cellulaire. Des travaux lui attribuent des rôles dans la régulation des sorties des voies MAPK/ERK et PI3K-AKT, le trafic des récepteurs et les réponses transcriptionnelles aux signaux extracellulaires. Elle est exprimée dans de nombreux tissus et a été associée au contrôle de la prolifération et de la différenciation cellulaires, ainsi qu’à la signalisation métabolique, notamment des processus sensibles à l’insuline dans les tissus adipeux et musculaires. Des modifications de l’expression de GPRC5B ont été liées à la signalisation inflammatoire et à des phénotypes oncogéniques dans plusieurs systèmes modèles, suggérant un intérêt pour l’étude de la biologie tumorale, des mécanismes des maladies métaboliques et des voies liées à l’immunité. En tant que régulateur associé à la membrane, elle est fréquemment étudiée pour son impact sur les interactions croisées entre récepteurs, la dynamique de la signalisation cellulaire et les programmes d’adaptation au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPRC5B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPRC5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPRC5B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPRC5B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPRC5B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPRC5B pour l'étude de la signalisation de GPRC5B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPRC5B essentiels à la fonction de GPRC5B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPRC5B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPRC5B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPRC5B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPRC5B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPRC5B plasmide HDR (h) et le GPRC5B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPRC5B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPRC5B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.