GPRC5B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409271-ACT

GPRC5B (G-Protein-gekoppelter Rezeptor, Klasse C, Gruppe 5, Mitglied B) ist ein verwaistes, GPCR-ähnliches Transmembranprotein, das an der Modulation der Rezeptorsignalübertragung an der Plasmamembran sowie in endomembranären Kompartimenten beteiligt ist. Es wurde mit der Regulation von MAPK/ERK- und PI3K–AKT-assoziierten Prozessen in Verbindung gebracht, die Proliferation, Differenzierung und zelluläre Stressantworten prägen, mit kontextabhängigen Effekten auf inflammatorische Signalwege und die metabolische Homöostase. Veränderungen der GPRC5B-Expression wurden in mehreren Tumorarten sowie bei Erkrankungen mit fehlregulierten Immun- oder Stoffwechselwegen beschrieben, was seine Eignung als Knotenpunkt zur Untersuchung der Signalintegration unterstreicht. Entsprechend wird GPRC5B häufig in Modellen der onkogenen Signalübertragung, der Adipozyten- und Immunzellbiologie sowie des Rezeptor-Cross-Talks untersucht, der Zellzustandsübergänge beeinflusst.

GPRC5B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GPRC5B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GPRC5B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GPRC5B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GPRC5B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GPRC5B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GPRC5B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GPRC5B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GPRC5B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GPRC5B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.