Plasmide Double Nickase (m) GPR91: sc-429973-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) GPR91 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR91 Double Nickase (m) et le plasmide GPR91 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Sucnr1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) GPR91 | sc-429973-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) GPR91 | sc-429973-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Sucnr1* code GPR91, un récepteur couplé aux protéines G sensible au succinate, qui relie le stress métabolique aux signalisations inflammatoires et vasculaires. Le succinate extracellulaire produit lors d’hypoxie, d’ischémie ou de dysfonction mitochondriale peut activer GPR91 et déclencher des voies en aval, notamment une signalisation médiée par Gαi/Gαq, l’activation de MAPK/ERK, des flux intracellulaires de Ca²⁺ et la modulation de l’AMPc, influençant la production de cytokines et la communication paracrine. L’activité de GPR91 a été étudiée dans des contextes tels que la physiologie rénale et les réponses aux lésions, la signalisation angiogénique rétinienne, l’inflammation du tissu adipeux et l’activation des cellules immunitaires, faisant de *Sucnr1* un nœud utile pour explorer la régulation immunométabolique. Ces processus sont pertinents dans des modèles expérimentaux de syndrome métabolique, de fibrose et de remodelage tissulaire inflammatoire, où l’accumulation de succinate sert de signal.
GPR91 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sucnr1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sucnr1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sucnr1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sucnr1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.