Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPR88: sc-403566-ACT

GPR88 code un récepteur orphelin couplé aux protéines G (GPCR) fortement enrichi dans les neurones épineux moyens du striatum, et contribue à ajuster l’excitabilité neuronale ainsi que la transmission synaptique. Via son couplage à des protéines G hétérotrimériques, GPR88 est impliqué dans la modulation de la signalisation dépendante de l’AMPc, des cascades de kinases en aval et des programmes transcriptionnels dépendants de l’activité qui façonnent la fonction des circuits corticostriataux. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de GPR88 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, notamment des modifications du contrôle moteur, des comportements liés à la récompense et des processus cognitifs. Ces caractéristiques font de GPR88 une cible utile pour disséquer les voies régulées par les GPCR dans des modèles neuronaux humains et pour étudier les réponses des réseaux géniques dans des cellules de lignée striatale.

GPR88 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPR88 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR88 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPR88 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPR88, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR88. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPR88 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR88 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR88 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPR88 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.