Plasmide Double Nickase (h) GPR56: sc-406370-NIC

ADGRG1 code pour GPR56, un récepteur d’adhésion couplé aux protéines G (GPCR) enrichi dans les lignées neuronales et immunitaires, qui intègre les signaux de la matrice extracellulaire aux voies de signalisation intracellulaires. GPR56 participe aux interactions cellule–cellule et cellule–matrice, modulant des processus tels que la migration neuronale, le développement cortical et l’organisation du cytosquelette via des voies liées aux GPCR, notamment la dynamique de l’actine pilotée par RhoA. Dans les contextes hématopoïétiques, GPR56 a été impliqué dans la régulation de l’adhérence, du trafic et des états fonctionnels de sous-populations leucocytaires, ce qui soutient l’étude du positionnement des cellules immunitaires et des programmes d’activation. Une activité dérégulée d’ADGRG1/GPR56 a été associée à des troubles du neurodéveloppement et à des modifications du comportement des cellules tumorales, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation d’adhérence et de la différenciation spécifique de lignée.

GPR56 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADGRG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADGRG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADGRG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADGRG1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.