Plásmido Doble Nickase (h) GPR54: sc-403766-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GPR54 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GPR54 (h) y el plásmido de doble nickasa GPR54 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KISS1R. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GPR54 | sc-403766-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GPR54 | sc-403766-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KISS1R codifica el receptor acoplado a proteína G GPR54 (también conocido como KISS1R), un receptor de alta afinidad para las kisspeptinas que regula la actividad de las neuronas de GnRH y vincula señales metabólicas y del desarrollo con la activación del eje hipotálamo‑hipófisis‑gonadal. Tras la unión del ligando, GPR54 señaliza principalmente a través de Gαq/11 para estimular la fosfolipasa C, la movilización intracelular de Ca²⁺ y la actividad de la vía MAPK/ERK aguas abajo, influyendo en la expresión génica y la secreción neuroendocrina. La alteración de la señalización de KISS1R se asocia con fenotipos endocrinos reproductivos, como el hipogonadismo hipogonadotrópico y trastornos del inicio puberal, y se ha estudiado por sus posibles funciones en programas de migración e invasión celular en diversos sistemas modelo. Estas características convierten a KISS1R en una diana útil para investigar la señalización de calcio impulsada por GPCR, la regulación neuroendocrina y el crosstalk entre vías en células humanas.
GPR54 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KISS1R en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KISS1R. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KISS1R. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KISS1R alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.