Plasmide Double Nickase (h) GPR4: sc-403659-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPR4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR4 Double Nickase (h) et le plasmide GPR4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPR4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPR4 | sc-403659-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPR4 | sc-403659-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR4 code pour un récepteur couplé aux protéines G sensible aux protons, qui agit comme capteur du pH extracellulaire en reliant les signaux d’un microenvironnement acide à la signalisation intracellulaire par seconds messagers. Lors de son activation, GPR4 peut engager les voies Gs et G13 afin de moduler la production d’AMPc et la dynamique du cytosquelette dépendante de Rho, influençant la fonction de barrière endothéliale, le trafic des leucocytes et l’expression de gènes inflammatoires. Cette signalisation dépendante du pH s’intègre à des processus de régulation vasculaire et immunitaire fréquemment perturbés dans des contextes tissulaires associés à l’hypoxie et à l’acidose. La dérégulation de l’activité de GPR4 a été étudiée en lien avec l’inflammation et la dysfonction vasculaire, fournissant un lien mécanistique entre l’acidité du microenvironnement et des phénotypes cellulaires pertinents pour la maladie.
GPR4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPR4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPR4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPR4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPR4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.