GPR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403659

Übersicht

GPR4 kodiert einen protonensensitiven G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der als zellulärer pH‑Sensor fungiert und eine extrazelluläre Azidose in intrazelluläre Signalgebung übersetzt. Nach Aktivierung koppelt GPR4 an heterotrimere G‑Proteine und moduliert cAMP/PKA‑ sowie phospholipase‑C‑abhängige Signalwege, wodurch Calciumflüsse, Zytoskelettdynamik und Transkriptionsprogramme beeinflusst werden, die mit dem Verhalten von Endothel‑ und Immunzellen verknüpft sind. Seine Expression ist insbesondere in vaskulären und inflammatorischen Kontexten erhöht, in denen saure Mikroumgebungen häufig auftreten, und wurde im Zusammenhang mit Endothelaktivierung, Rekrutierung von Leukozyten sowie Gewebereaktionen auf Hypoxie und Entzündung untersucht. Eine veränderte GPR4‑Signalgebung wurde mit fehlregulierter inflammatorischer Signalübertragung und Stressantworten der Mikroumgebung in Verbindung gebracht, die für die Biologie kardiovaskulärer und immunvermittelter Erkrankungen relevant sind.

Das GPR4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GPR4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GPR4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GPR4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GPR4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GPR4-Exone abzielen, die für die GPR4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GPR4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPR4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GPR4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR4 HDR-Plasmid (h) und GPR4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GPR4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GPR4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.