Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPR39: sc-410802-ACT

Le GPR39 humain code un récepteur couplé aux protéines G sensible au zinc, qui intègre la disponibilité extracellulaire de Zn2+ à la signalisation intracellulaire afin de moduler l’excitabilité cellulaire, la sécrétion et les programmes de survie. Lors de son activation, GPR39 peut se coupler aux voies associées à Gq/11 et à Gs, en favorisant une signalisation calcique dépendante de la phospholipase C ainsi que des cascades AMPc/PKA qui convergent avec MAPK/ERK et des réponses transcriptionnelles. Ces sorties de signalisation ont été reliées à la régulation de l’homéostasie épithéliale et métabolique, de la signalisation inflammatoire et de la fonction neuronale, faisant de GPR39 un nœud utile pour étudier la dynamique des voies contrôlées par les GPCR. Une expression ou une signalisation altérée de GPR39 a été associée dans la littérature à des phénotypes cardiométaboliques, à des processus de barrière gastro-intestinale et à des paramètres neurocomportementaux, ce qui soutient sa pertinence pour la modélisation mécanistique des maladies dans des systèmes cellulaires.

GPR39 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPR39 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR39 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPR39 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPR39, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR39. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPR39 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR39 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR39 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPR39 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.