Plasmide Double Nickase (h) GPR30: sc-402502-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPR30 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR30 Double Nickase (h) et le plasmide GPR30 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPER1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPR30 | sc-402502-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPR30 | sc-402502-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GPER1** code **GPR30 (GPER)**, un récepteur aux œstrogènes couplé aux protéines G associé à la membrane, qui médie une signalisation œstrogénique rapide, non génomique. Lorsqu’il est activé, **GPR30** module des voies de seconds messagers incluant **cAMP/PKA**, la mobilisation du **calcium intracellulaire**, ainsi que les cascades **MAPK/ERK** et **PI3K/AKT**, influençant la prolifération, la survie et la migration cellulaires, ainsi que les réponses inflammatoires. L’activité de **GPER1** s’entrecroise avec la transactivation de **l’EGFR** et, plus largement, avec les réseaux de signalisation des hormones stéroïdiennes, façonnant des programmes transcriptionnels via la signalisation des kinases en aval. Une dérégulation de la signalisation **GPER1/GPR30** a été impliquée dans des cancers hormono‑dépendants, des phénotypes cardiovasculaires et métaboliques, ainsi que des processus liés à l’immunité, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en signalisation cellulaire et dans des modèles de maladie.
GPR30 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPER1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPER1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPER1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPER1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.