Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPR30: sc-402502-ACT

GPER1 code pour GPR30 (GPER), un récepteur membranaire des œstrogènes qui médie une signalisation œstrogénique rapide, non génomique, et s’intègre aux programmes transcriptionnels canoniques sensibles aux œstrogènes. L’activation de GPR30 peut mobiliser les voies cAMP/PKA, la transactivation d’EGFR, MAPK/ERK, PI3K/AKT et les flux intracellulaires de Ca²⁺, influençant la prolifération, la migration, le métabolisme et la signalisation inflammatoire de manière dépendante du type cellulaire. Une dérégulation de la signalisation GPER1/GPR30 a été impliquée dans des cancers hormono-dépendants, des dysfonctionnements cardiovasculaires et métaboliques, ainsi que des processus neuro-inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer les interconnexions entre voies induites par les œstrogènes. En tant que récepteur de signalisation associé à des biomarqueurs, GPR30 est fréquemment étudié pour son impact sur les transitions d’état cellulaire, le trafic des récepteurs et les réseaux de gènes de réponse au stress.

GPR30 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPER1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR30 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPER1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPER1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR30. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPER1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR30 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR30 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPER1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.