Plasmide Double Nickase (h) GPR3: sc-405441-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPR3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR3 Double Nickase (h) et le plasmide GPR3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPR3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GPR3 Antibody (C-9): sc-271875
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPR3 | sc-405441-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPR3 | sc-405441-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR3 code un récepteur orphelin de classe A couplé aux protéines G (RCPG) qui présente une signalisation constitutive, en particulier via un couplage à Gs entraînant une augmentation de l’AMPc intracellulaire. Par l’intermédiaire de voies dépendantes de l’AMPc/PKA, GPR3 peut influencer l’excitabilité neuronale, la progression du cycle cellulaire et des programmes de différenciation, et a été impliqué dans la régulation de l’arrêt méiotique des ovocytes ainsi que dans certains aspects de l’homéostasie métabolique. Dans le système nerveux, l’expression de GPR3 est enrichie dans plusieurs régions du cerveau et est associée à la modulation de la signalisation synaptique et des réponses neuro-inflammatoires. Des altérations de l’activité ou de l’expression de GPR3 ont été associées, dans des contextes de recherche, à des processus liés à la neurodégénérescence, à des phénotypes de l’humeur et des fonctions cognitives, ainsi qu’à des traits métaboliques, ce qui soutient sa pertinence pour l’exploration mécanistique des voies de signalisation.
GPR3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPR3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPR3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPR3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPR3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.