Plasmide Double Nickase (h) GPR20: sc-407471-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPR20 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR20 Double Nickase (h) et le plasmide GPR20 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPR20. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPR20 | sc-407471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPR20 | sc-407471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR20 code un récepteur orphelin couplé aux protéines G (RCPG) enrichi dans le système nerveux central, et l’on pense qu’il module la signalisation intracellulaire via des protéines G hétérotrimériques et des voies de seconds messagers en aval telles que cAMP/PKA et MAPK/ERK. En influençant la transduction du signal médiée par les récepteurs, GPR20 peut affecter la communication neuronale, les programmes de différenciation cellulaire et les réponses transcriptionnelles qui intègrent des signaux extracellulaires. Une signalisation RCPG dérégulée, incluant une expression ou une activité altérée de récepteurs orphelins, a été étudiée dans le contexte de la biologie neurodéveloppementale et neuropsychiatrique, ainsi que dans d’autres systèmes plus larges où les réseaux de RCPG façonnent les transitions d’état cellulaire. En tant que récepteur membranaire dont le ligand est peu caractérisé, GPR20 est souvent étudié au moyen de perturbations génétiques afin de définir la connectivité des voies et des rôles fonctionnels dépendant du contexte.
GPR20 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPR20 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPR20. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPR20. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPR20.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.