Plasmide Double Nickase (h) GPR174: sc-413678-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPR174 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR174 Double Nickase (h) et le plasmide GPR174 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPR174. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPR174 | sc-413678-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPR174 | sc-413678-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR174 code un récepteur couplé aux protéines G fortement exprimé dans certains sous-ensembles de cellules immunitaires, où il contribue à la transduction de signaux qui façonnent l’activation des lymphocytes T, la production de cytokines et l’homéostasie immunitaire. En tant que récepteur membranaire, GPR174 recrute des protéines G hétérotrimériques afin de moduler des voies de seconds messagers telles que la signalisation AMPc/PKA, ainsi que des programmes transcriptionnels en aval qui influencent l’état cellulaire et le trafic cellulaire. Une signalisation GPCR dérégulée dans les lymphocytes est pertinente pour la biologie de l’inflammation et de l’auto-immunité, et des études génétiques ont associé une activité altérée de GPR174 à des variations de phénotypes immunitaires. Ainsi, GPR174 constitue un nœud d’intérêt pour étudier le contrôle, médié par les récepteurs, des réponses immunitaires adaptatives et de la différenciation fonctionnelle des lymphocytes.
GPR174 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPR174 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPR174. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPR174. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPR174.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.