Particules Lentivirales d'Activation (h) GPR171: sc-412047-LAC

GPR171 code pour un récepteur couplé aux protéines G (GPCR) orphelin de classe A (de type rhodopsine) qui participe à la signalisation neuromodulatrice et à la régulation des voies intracellulaires de seconds messagers, notamment les cascades de l’AMPc et de MAPK médiées par les GPCR. Dans le système nerveux central, GPR171 a été associé au contrôle du comportement alimentaire, aux circuits de la récompense et aux réponses liées au stress, en accord avec des rôles dans la communication synaptique et l’excitabilité des réseaux neuronaux. Des études transcriptomiques et fonctionnelles ont relié une activité altérée de GPR171 à des phénotypes neuropsychiatriques et métaboliques, ce qui étaye son intérêt comme nœud mécanistique pour disséquer la signalisation au niveau des circuits. En tant que récepteur membranaire, il constitue un modèle exploitable pour étudier le trafic des récepteurs, la découverte de ligands et le couplage aux effecteurs en aval dans des systèmes cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales GPR171 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GPR171 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GPR171 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GPR171, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GPR171. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GPR171 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.