Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPR17: sc-402977-ACT

GPR17 code un récepteur couplé aux protéines G impliqué dans la signalisation purinergique et celle des leucotriènes cystéinylés, intégrant des signaux extracellulaires de nucléotides et de médiateurs lipidiques dans des voies intracellulaires de seconds messagers. Dans le système nerveux central, GPR17 est associé à la progression de la lignée oligodendrocytaire et aux programmes de myélinisation, en influençant les réponses cellulaires à des signaux liés aux lésions et à des microenvironnements inflammatoires. Son activité s’inscrit à l’interface de réseaux régulés par les GPCR, qui modulent la signalisation des nucléotides cycliques, les cascades MAPK, ainsi que des processus chimiotactiques ou de réponse au stress selon le contexte cellulaire. Une expression ou une signalisation dérégulée de GPR17 a été étudiée dans des affections neuro-inflammatoires et démyélinisantes, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie gliale et de la signalisation associée aux dommages.

GPR17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPR17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPR17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPR17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPR17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR17 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPR17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.