Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPR14: sc-402393-ACT

UTS2R (GPR14) code le récepteur humain de l’urotensine II, un RCPG (GPCR) de classe A qui se lie à l’urotensine II et à des peptides apparentés pour réguler le tonus vasomoteur et la contractilité cellulaire. L’activation du récepteur engage des protéines G hétérotrimériques, déclenchant la signalisation via la phospholipase C, la mobilisation du Ca2+ intracellulaire, ainsi que les voies MAPK/ERK et RhoA/ROCK en aval, qui influencent la fonction du muscle lisse et les réponses prolifératives. L’expression et la signalisation de l’UTS2R ont été étudiées en biologie cardiovasculaire et rénale, notamment dans des contextes liés au remodelage vasculaire, à des voies associées à l’hypertension et aux réponses au stress cardiométabolique. En outre, l’activité de GPR14 a été examinée dans des réseaux de signalisation neuroendocriniens et inflammatoires, où des programmes transcriptionnels médiés par les RCPG façonnent les changements d’état cellulaire.

GPR14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UTS2R sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UTS2R dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UTS2R, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR14. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UTS2R natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR14 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR14 dans les cellules tumorales présentant une expression de UTS2R silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.