GPR125 Double Nickase Plasmid (h): sc-408335-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR125 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR125 Double-Nickase-Plasmid (h) und GPR125 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADGRA3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR125 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408335-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR125 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408335-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADGRA3 kodiert den Adhäsions‑G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor GPR125, einen multipassigen Membranrezeptor, der an Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Interaktionen beteiligt ist und die intrazelluläre Signalübertragung über GPCR‑assoziierte Signalwege moduliert. Als Adhäsions‑GPCR ist GPR125 mit der Regulation von Zellpolarität, Migration und Differenzierungsprogrammen verknüpft; es wurden Funktionen in der Biologie epithelialer Zellen sowie von Stamm‑/Progenitorzellen beschrieben. Veränderte ADGRA3/GPR125‑Expression wurde im Kontext von Tumorbiologie und Gewebeumbau untersucht, wobei Änderungen in adhäsionsgekoppelter Signalgebung invasives Verhalten und Reaktionen auf die Mikroumgebung beeinflussen können. Diese Eigenschaften machen ADGRA3 zu einem nützlichen Ziel, um adhäsionsabhängige Signalnetzwerke und linienassoziierte Transkriptionsprogramme in menschlichen Zellmodellen zu analysieren.
GPR125 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADGRA3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADGRA3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADGRA3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADGRA3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.