GPR110 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405326-ACT

ADGRF1 kodiert den Adhäsions‑G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor GPR110, einen multipassigen Membranrezeptor, der an der Regulation von Zell‑Zell‑Interaktionen und der Integration extrazellulärer Signale an der Plasmamembran beteiligt ist. Als aGPCR kann GPR110 an heterotrimere G‑Proteine koppeln und so die Second‑Messenger‑Signalübertragung sowie nachgeschaltete Programme steuern, die Proliferation, Überleben und Differenzierung kontrollieren – mit kontextabhängigen Effekten je nach Gewebetyp. Eine veränderte ADGRF1‑Expression wurde in Studien zur Tumorbiologie und zu Entwicklungsprozessen beschrieben, was es zu einem nützlichen Ziel für die Analyse GPCR‑getriebener transkriptioneller und phänotypischer Plastizität macht. Die Kartierung ADGRF1‑abhängiger Signalnetzwerke kann mechanistische Forschung zu Zellmigration, stammzellähnlichen Zuständen und der Reaktionsfähigkeit auf Mikroumgebungsreize unterstützen.

GPR110 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADGRF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GPR110 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADGRF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADGRF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GPR110-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADGRF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GPR110-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GPR110-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADGRF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.