Particules Lentivirales d'Activation (h) GPR105: sc-405954-LAC

P2RY14 (GPR105) code un GPCR purinergique couplé à Gi qui détecte des UDP-sucres extracellulaires tels que l’UDP-glucose et l’UDP-galactose, reliant la libération de sucres nucléotidiques à la signalisation immunitaire et épithéliale. L’activation du récepteur supprime généralement l’AMPc et peut moduler les programmes MAPK/ERK et chimiotactiques, influençant le recrutement des leucocytes, les réponses cytokiniques et l’inflammation associée aux barrières. L’activité de GPR105 recoupe la signalisation purinergique de danger dans des contextes de stress tissulaire et d’exposition microbienne, ce qui la rend pertinente pour l’étude des réseaux inflammatoires et de la communication au sein du microenvironnement tumoral–immunitaire. Des altérations de l’expression de P2RY14 et du couplage des voies ont été associées à une dérégulation des réponses myéloïdes et épithéliales, ce qui justifie son investigation dans des modèles d’immunologie, de fibrose et de biologie du cancer.

Les particules d'activation lentivirales GPR105 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de P2RY14 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GPR105 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription P2RY14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GPR105. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif P2RY14 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.