Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPNMB (m): sc-430005

Présentation

Gpnmb code la glycoprotéine transmembranaire de type I GPNMB (glycoprotein non-metastatic melanoma protein B), une glycoprotéine enrichie dans les macrophages, les cellules dendritiques, les ostéoclastes, les mélanocytes et la microglie. GPNMB est impliquée dans le trafic lysosomal et endosomal, la phagocytose, le remodelage de la matrice extracellulaire et des programmes d’adhérence cellulaire qui modulent l’activation immunitaire et la réparation tissulaire. Son expression est souvent induite par des signaux inflammatoires et le stress cellulaire, ce qui la relie aux voies contrôlant la polarisation myéloïde, la résorption osseuse et la biologie de la pigmentation. Une dérégulation de GPNMB a été associée à des modèles de neuroinflammation et de neurodégénérescence, au remodelage métabolique et fibrotique, ainsi qu’à des phénotypes du microenvironnement tumoral–immunitaire, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques dans des systèmes murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPNMB (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gpnmb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gpnmb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gpnmb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPNMB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gpnmb pour l'étude de la signalisation de GPNMB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gpnmb essentiels à la fonction de GPNMB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gpnmb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPNMB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GPNMB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gpnmb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPNMB plasmide HDR (m) et le GPNMB (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gpnmb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gpnmb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.