GPI-PLD Double Nickase Plasmid (h): sc-404938-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPI-PLD Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPI-PLD Double-Nickase-Plasmid (h) und GPI-PLD Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPLD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GPI-PLD: sc-365096
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPI-PLD Double Nickase Plasmid (h) | sc-404938-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPI-PLD Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404938-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPLD1 kodiert die glycosylphosphatidylinositol-spezifische Phospholipase D1 (GPI-PLD), ein sezerniertes Enzym, das GPI-Anker hydrolysiert und die Freisetzung GPI-verankerter Proteine aus Zellmembranen in extrazelluläre Kompartimente reguliert. Durch die Modulation der Membranassoziation vielfältiger GPI-verankerter Proteine kann GPI-PLD die Zell-Zell-Signalübertragung, immunbezogene Prozesse und den Transport lipidverknüpfter Proteine über Gewebe hinweg beeinflussen. Die Expression von GPLD1 und die zirkulierende GPI-PLD-Aktivität wurden im Kontext der Stoffwechsel- und Entzündungsbiologie untersucht, einschließlich Zusammenhängen mit Insulinresistenz, leberassoziierten Signalwegen und systemischer Immunmodulation. Diese funktionellen Verknüpfungen machen GPLD1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zum GPI-Anker-Umsatz, zur extrazellulären Enzymaktivität und zum Remodeling des Proteoms.
GPI-PLD Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPLD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPLD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPLD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPLD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.